应用SYBRgreen Ⅰ实时荧光定量PCR检测大鼠脊髓IL-1RI mRNA

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白细胞介素1(Interleukine1,IL-1)是一种重要的细胞因子,主要由单核-巨噬细胞产生.IL-1的生物活性由两种不同的受体介导,Ⅰ型白细胞介素1受体(P80typeⅠinterleukine-1Receptor,IL-1RI)和Ⅱ型白细胞介素1受体(P68typeⅡinterleukine-1Receptor,IL-1RⅡ),两种受体都属于免疫球蛋白超家族,都能在多种细胞和组织中表达.但IL-1RⅡ的胞内段氨基酸结构域很短,所以只有IL-1RI转导IL-1刺激信号,而IL-1RII仅起调节作用(1).因此,IL-1RI的测定对于阐明许多疾病状况下的免疫病理机制显得尤为重要.然而,应用ELISA等技术对IL-1RI蛋白水平进行测定存在着所需样本量大(尤其是动物实验所得样本更少)、方法敏感性较差等缺点.逆转录PCR(RT-PCR)为从小样本中研究基因表达水平提供了有力的工具,但终点法的RT-PCR由于PCR后期扩增效率的变化不能很好地反应初始模板的量.本文应用荧光染料SYBRgreenI建立了实时荧光定量PCR的方法,并对大鼠脊髓组织的IL-1R1mRNA进行了检测.
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