pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M261重组载体构建及其对NIH3T3细胞增殖和凋亡研究

来源 :2011年第9届中国北方实验动物科技年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:myloft1d
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  目的:构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M261重组表达载体,为研究DJ-1M26I突变与细胞增殖、凋亡的关系及建立转基因动物模型奠定基础。方法:采用突变试剂盒将DJ-1蛋白第26位氨基酸进行突变。分别构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M261重组表达栽体,并采用脂质体介导的方法分别将其转染入N]H3T3细胞,500μg/ml G418压力筛选稳定克隆,对2种转染细胞在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行鉴定,采用MTT染色方法和AnnexinV-FITC试剂盒进行转染阳性克隆细胞的细胞活力与细胞凋亡检测。结果:peDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc.His-DJ-1M26I重组质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后,PCR方法检测分别获得1个和3个阳性细胞克隆,RT-PCR及western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,MTT实验结果初步证明转染DJ.1嘲基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率低于正常NIH3T3细胞组(p<0.05),转染DJ-1基因的NIH3T3阳性细胞细胞增殖速率与正常NIH3T3细胞相比无明显差别:细胞凋亡检测表ql转染DJ.1ma基因的NIH3T3阳性细胞细胞凋亡率高于正常NIH3T3细胞,转染DJ一1基因的NIH3T3阳性细胞细胞凋亡率低于正常NIH3T3细胞(p
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糖尿病是一种内分泌代谢紊乱、胰腺功能退弱的常见、多发疾病。目前糖尿病已成为继心脑血管疾病及癌症之后严重威胁人们健康的疾病之一,引起国内外医学界的普遍关注。如何积极治疗治愈急、慢性糖尿病及并发症。本文介绍了用中药、针灸、推拿、食疗结合心理、运动等综合方法治疗该病30例,疗效满意,值得推广。
颈椎病是临床上常见、多发、疑难病,本文对疾病的鉴别诊断、诊断部位以及疾病的类型进行了分析并加以总结,介绍了针刀治疗方法,并指出若治疗到位一般1~2次,多者3次,即可治愈,如未愈者有特殊不适,病情无特殊变化,三个月后复诊,如需治疗再找痛点,结合临床作针刀治疗,如无特殊,即为全愈,本文诊治方法共同仁借鉴,参考应用,有不到之处敬请谅解、指证、共同探讨,为针刀工作顺利开展,作出不懈努力。
头痛、头昏及偏头痛是一症,其病因机制至今仍未定论。本文以解剖为基础,肌源性筋膜劳损为指导,将常见的神经性、血管性头痛、头昏及偏头痛的病因机制及治疗方法作一探讨。
目的:探讨针刀松解结合手法复位治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。方法:对患者腰椎及相关区带的病变压痛点讲行针刀松解后,予以手法整复错位的腰椎周关节。结果;选择相关患者63例,临床治愈41例,占65.1%,显效15例,占23.8%,总有效率88.9%。结论:针刀松解结合手法复位是治疗腰椎间盘突出症的有效方法。
目的:观察用中西医结合的方法综合治疗冻结肩的临床疗效。方法:对150例符合诊断标准的冻结肩患者分二组,治疗组90例采用针刀松解,手法推拿配合关节腔内注射玻璃酸钠,中药内服,综合治疗;对照组60单纯应用针刀松解治疗,比较二者的临床疗效。结果:1个疗程后,90例治疗组中,优60例,占66.67%:良23例,占25.55%;优良率为92.22%,与对照组比较差异有极显著性意义(P<0.01)。结论:冻结
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目的:观察桂枝茯苓胶囊对子宫内膜异位症模型大鼠脾脏中的CD4+T淋巴细胞数和NK细胞杀伤活性的影响。方法:改进制作大鼠子宫内膜异位症动物模型,桂枝茯苓胶囊0.256,1.024 g·kg-1,28d后取脾脏,淋巴细胞分离液分离淋巴细胞,采用流式细胞分析术测定大鼠脾脏中CD4+T淋巴细胞数;NK细胞分离液分离NK细胞.将NK细胞与K562细胞共孵育后,MTT法检测其杀伤活性。结果:低剂量组CD4+T
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