【摘 要】
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利用PCR技术扩增PPV LXB-PPV-20-06株NS1基因全序列，将目的基因与原核表达载体pET-32a(+)进行连接并转化，重组质粒经PCR和双酶切鉴定并测序。测序结果表明，目的基因正确地插入到
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 猪传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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利用PCR技术扩增PPV LXB-PPV-20-06株NS1基因全序列，将目的基因与原核表达载体pET-32a(+)进行连接并转化，重组质粒经PCR和双酶切鉴定并测序。测序结果表明，目的基因正确地插入到重组质粒当中。通过对表达宿主菌的选择，PPV LXB-PPV-20-06株NS1基因在Rosetta(DE)plysS菌中的到良好的表达，并确定了NS1基因的最佳诱导条件：IPTG终浓度为0.6mmol/L、诱导时间为3.5h、诱导温度为37℃。表达产物经SDS-PAGE分析，得到分子量约为97ku的重组蛋白，除了包涵体形式表达外，一部分重组蛋白以可溶性形式表达。重组蛋白经Western blot检测，可与PPV阳性血清反应。这为NS1蛋白在临床诊断中的应用打下基础。
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