【摘 要】
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[目的]本文以耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)KM1为材料,克隆其低温脂肪酶基因lip1,在大肠杆菌表达体系中表达低温脂肪酶Lip1,研究分析其最适作用温度、pH及金属离
【机 构】
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昆明理工大学生命科学与技术学院,云南昆明650500;甘肃农业大学生命科学技术学院,甘肃兰州730070中国科学院微生物研究所,北京朝阳100101昆明理工大学生命科学与技术学院,云南昆明650500
【出 处】
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第十六次全国环境微生物学学术研讨会
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[目的]本文以耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)KM1为材料,克隆其低温脂肪酶基因lip1,在大肠杆菌表达体系中表达低温脂肪酶Lip1,研究分析其最适作用温度、pH及金属离子对其活性影响等酶学性质,为低温脂肪酶Lip1的批量生产和实际应用奠定基础.[方法]采用常规PCR扩增低温脂肪酶基因lip1片段,经与基因表达载体pET28a连接、转化E coli BL21 (DE3),构建工程菌株；诱导表达低温脂肪酶Lip1,经镍柱亲和层析法分离纯化Lip1,LB-罗丹明B平板检测脂肪酶活性,SDSPAGE检测低温脂肪酶Lip1分子量大小,碱式滴定法研究脂肪酶的部分酶学性质.[结果]成功克隆了耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica) KM1的低温脂肪酶基因lip1,获得可表达低温脂肪酶Lip1的工程菌株,建立了Lip1诱导表达体系；经镍柱纯化后,SDS-PAGE检测可得到大约35.0 kD的单一蛋白质条带；酶学性质研究表明,低温脂肪酶Lip1最适反应温度为25℃,最适pn值为7.5.结论脂肪酶Lip1为典型的低温酶,在0℃具有酶活,4℃条件下保存一周不影响其酶活.该酶在pH 6.0～8.0范围内保持性质稳定, 1 mmol/L的K+、Mg2+可使酶活提高约20％；10 mmol/L Na+、K+、Ca2+也能使酶活提高约10％～20％.
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