截短型重组荞麦胰蛋白酶抑制剂的表达,纯化及理化性质分析

来源 :泛环渤海地区(七省二市)生物化学与分子生物学会2010年学术交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fdgerg454h4
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  蛋白酶抑制剂是一类对蛋白酶活性有抑制作用的蛋白质,在动物、植物、微生物以及人类自身的代谢调控过程中起着非常重要的作用。本实验室先前通过分子生物学技术获得了一种重组荞麦胰蛋白酶抑制剂BTI-2,研究表明,其生物学活性与天然BTI活性相近,体外实验显示它能够诱导不同肿瘤细胞凋亡,但其作用机制尚不明确。为了揭示BTI-2结构与功能的关系,本研究根据BTI-2的氨基酸序列以及空间结构,截短了BTI-2 C末端的3个氨基酸,通过PCR扩增获得目的基因BTI-3,并将其克隆到pEx-secI表达载体中,再将重组质粒pEx-secI-BTI-3转入大肠杆菌BL21中大量表达,获得可溶性目的蛋白。经过阴离子交换层析得到高纯度的BTI-3,纯度达到90%以上。
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