【摘 要】
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目的:通过构建可诱导过表达ERG11基因的酿酒酵母菌株,来探讨酿酒酵母中唑类药物靶酶ERG11基因过度表达对氟康唑敏感性的影响。方法:用PCR法扩增酿酒酵母ERG11基因（NCBI access
【机 构】
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北京大学第一医院皮肤性病科,北京大学真菌和真菌病研究中心,皮肤病分子诊断北京市重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81471925)
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目的:通过构建可诱导过表达ERG11基因的酿酒酵母菌株,来探讨酿酒酵母中唑类药物靶酶ERG11基因过度表达对氟康唑敏感性的影响。方法:用PCR法扩增酿酒酵母ERG11基因（NCBI accession number NM001179137.1）的开放读框（open reading frame,ORF）,利用DNA重组的方法将其克隆到酿酒酵母表达载体p YES2;将重组后的质粒转化到尿嘧啶缺陷型酿酒酵母INVSc1中,在选择培养基SC-U中筛选得到酿酒酵母转化菌株Ip YES-ERG11,同时将转化了空载体p YES2的Ip YES酵母菌株作为对照;然后,在半乳糖诱导的条件下,通过菌落计数法、E-test法、纸片扩散法及微量液基稀释法测定Ip YES-ERG11及Ip YES对氟康唑的敏感性。结果:四种药敏试验方法均显示半乳糖诱导后Ip YES-ERG11对氟康唑的敏感性降低。结论:ERG11基因过度表达可导致酿酒酵母对氟康唑产生耐药性;半乳糖诱导的酵母过表达系统可用于基因表达量与效应关系的研究。
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