【摘 要】
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磷脂酶A2抑制剂(phospholipase A2 inhibitor,PLI)是特异性结合分泌型磷脂酶A2(Secretory phospholipase A2,sPLA2)的一类解毒蛋白,分为α、β、γ三种类型,其中PLIγ分
【机 构】
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南昌大学基础医学院生物化学教研室,江西 南昌 330006
【出 处】
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第十一届中国生物毒素研究及医药应用年会
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磷脂酶A2抑制剂(phospholipase A2 inhibitor,PLI)是特异性结合分泌型磷脂酶A2(Secretory phospholipase A2,sPLA2)的一类解毒蛋白,分为α、β、γ三种类型,其中PLIγ分布于各种蛇血清中.本实验室前期在华游蛇血清中筛选到了一种新PLIγ,它具有良好的抗蛇毒出血毒作用.本文基于Genbank中PLI基因序列, 设计了蛇PLI简并性引物,成功克隆了华游蛇PLIγ基因,并构建了TA克隆.通过测序, 重新设计了含NdeI和XhoI酶切位点的表达引物, 通过PCR克隆、酶切和连接, 将PLIγ 基因克隆至表达载体pET-28c, 其N端融合His6标签.将该重组质粒转染至大肠杆菌BL21中, 通过0.6mmol/L的IPTG诱导4h, 经SDS-PAGE和his6标签抗体western blot检测, 发现在22.4KD处具有表达产物His6-PLIγ蛋白,表达量达到20％以上.
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