HPLC-亚甲蓝法测定大鼠血液中大蒜辣素转化产物-硫化氢

来源 :第一届《药学学报》药学前沿论坛暨2015年中国药学会中药与天然药物专业委员会会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:klsslove520
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  20 世纪90年代后期,H2S被证实是继一氧化氮之后存在于体内的新型气体信号分子,有重要生理功能.内源性H2S 主要通过胱硫醚-β-合成酶(tathionine-p-synthase,CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(stathionine-ylyase,CSE)和巯基丙酮酸转硫酶(sulphurtransferase,MPST)作用产生,CBS 分布于心脑血管和肾脏,CSE 分布于心脑血管和肝脏,MPST分布于线粒体和细胞质中.大蒜为多年生葱属植物蒜(Allium sativum L.)的鳞茎,目前公认的大蒜活性成分是蒜氨酸(Alliin)经蒜酶(Alliinase)催化裂合产生的大蒜辣素(Allicin)等含硫化合物.2007 年Benavides GA首次提出大蒜含硫化合物在体内通过释放硫化氢发挥活性作用[1,2],本课题组已拥有大蒜辣素生物合成专利技术,大蒜辣素进入体内是否代谢为H2S 未见报道.生物样品中H2S 的经典检测方法是亚甲蓝分光光度法,但光谱法灵敏度较低,H2S 的浓度多高于10 μmol·L-1.本研究建立了HPLC-亚甲蓝法测定生物样品中H2S 的方法,以乙腈-0.3%三乙胺(31:69)为流动相,流速1.0 mL·min-1,柱温40℃,检测波长644 nm.结果显示,该方法专属性良好,H2S在0.8~80 μmol·L-1内线性关系良好,定量限和检测限分别为0.8 和0.4 μmol·L-1.将大蒜辣素加入大鼠血液中孵育10 min,可检测到H2S 产生,且随着大蒜辣素加入量增加,生成H2S 的量也随之增加,说明大蒜辣素进入血液经代谢产生H2S,大蒜辣素有望成为H2S 的供体含硫物质.
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