【摘 要】
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目的 克隆、表达核糖体磷蛋白P2基因并建立诊断山羊脑多头蚴病的间接ELISA诊断方法.方法 提取山羊脑多头蚴总RNA,RT-PCR技术扩增其核糖体磷蛋白P2(TmP2)基因,将TmP2基因克隆入原核表达载体pET-32a(+)中,构建pET-32a-TmP2原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot检测表达产物,用免疫荧光组化法检测TmP2
【机 构】
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四川农业大学动物医学院动物寄生虫病研究中心,成都 611130;成都农业科技职业学院,成都 611130
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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目的 克隆、表达核糖体磷蛋白P2基因并建立诊断山羊脑多头蚴病的间接ELISA诊断方法.方法 提取山羊脑多头蚴总RNA,RT-PCR技术扩增其核糖体磷蛋白P2(TmP2)基因,将TmP2基因克隆入原核表达载体pET-32a(+)中,构建pET-32a-TmP2原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot检测表达产物,用免疫荧光组化法检测TmP2基因在多头带绦虫成虫体内的表达分布情况,以TmP2重组抗原建立诊断山羊脑多头蚴感染间接ELISA方法并用建立的间接ELISA方法对人工感染多头带绦虫虫卵的山羊进行血清抗体检测.结果 结果显示TmP2基因ORF框为366bp,编码122个氨基酸,推导的蛋白分子大小为13.42kDa,与猪带绦虫核糖体磷蛋白P2基因序列相似性为94％.免疫荧光染色结果显示TmP2蛋白主要分布于多头带绦虫成虫体节的实质区；建立的间接ELISA诊断方法的敏感性达95％、特异性达94.7％,与山羊细颈囊尾蚴血清存在有交叉反应.抗体检测结果显示所建立的间接ELISA方法最早能在多头绦虫感染后第3周检测出血清抗体；山羊经药物治疗后大约两周,其血清抗体消失.结论 本研究鉴定了脑多头蚴TmP2基因的基本特征及该基因在多头带绦虫成虫体内的表达分布情况,以TmP2蛋白为抗原建立了快速、便捷的间接ELISA诊断方法,并应用该方法对人工感染多头带绦虫的山羊进行了血清抗体检测,揭示了TmP2基因作为诊断抗原和疫苗候选抗原的潜在价值.
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