目的 2009年全球大流行的甲型H1N1流感病毒给人类带来巨大的经济损失和社会恐慌。尽管疫情最终得到控制,但甲型H1N1流感病毒仍然潜藏人间,并呈现季节性流行。病毒的持续存在与流行将促使病毒发生变异和抗原性漂移,使针对甲型H1N1流感病毒的疫苗和人间血清屏障保护力逐渐减弱,最终可能因甲型H1N1流感病毒变种发生新的大流行。目前病毒的变异监测以基因测序和分子进化分析为主,较难鉴别病毒的有义突变和无义突变,因此,建立更为直接有效的甲型H1N1流感病毒的抗原性变异监测工具显得十分必要。方法本研究利用甲型H1N1流感疫苗株A/Califomia/07/2009免疫小鼠,采用小鼠杂交瘤技术获得了170多株血凝素(HA)特异性单克隆抗体(单抗)。利用血凝抑制试验(m)分析单抗与2009-201 1年间分离的20株甲型H1N1流感病毒代表株的反应性,然后利用测序分析和序列比对确定影响抗原反应性的关键变异氨基酸。结果根据单抗与病毒的HI反应谱不同,遴选出17个单抗代表株,将单抗分成10类(M1～M10),病毒分成8类(V1～V8)。其中M1单抗对所有病毒都有强的反应性,属于广谱单抗;而其余9类单抗都出现对某些毒株不反应的情况。基因测序和序列比对结果表明,8类病毒中只有V1类病毒的HA基因与A/Califomia/07/2009相比未见突变,其余7类病毒的HA基因都发生新的突变。值得注意的是,某些病毒由于HA基因的单点或双点突变导致病毒与HA单抗的反应性出现显著下降,这些位点包括H1N1经典Sa抗原区的128、158位氨基酸,Ca2抗原区的225位氨基酸,Sb抗原区的188位氨基酸等,这些位点的突变可能与病毒毒力改变有关。结论本研究尝试利用HA单抗研究甲型H1N1流感病毒HA抗原性变异情况,结果显示HA单抗能够快速鉴别出影响病毒抗原性的有意义的突变氨基酸,说明单抗可作为研究甲型H1N1流感病毒抗原性变异的新工具,可用于评估疫苗的有效性和选择新疫苗株。