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目的:为了研究Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D(HSV-2gD)的免疫学活性,通过PCR克隆了HSV-2 gD基因,并构建PCMV-gD的真核表达载体,在CHO细胞中表达,并研究真核细胞重组表达的HSV-2 gD的免疫学活性。
方法:用Vero细胞培养HSV2,抽提总DNA,经PCR获得全长cDNA,与PCMV真核表达载体连接,构建重组体PCMV-gD,并在CHO细胞中进行表达。免疫Balb/c鼠,采用ELISA检测小鼠血清中HSV2 gD特异性抗体水平,中和试验测定小鼠血清中和抗体水平。
结果: 经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序,结果表明已经成功构建了重组体PCMV-gD,并在CHO细胞中稳定表达了HSV-2 gD蛋白。该蛋白具有较好的免疫原性,可诱导中和抗体的产生,也可以诱导高滴度的HSV2特异性抗体。
结论: 本研究成功地构建了PCMV-gD真核表达载体并在CHO细胞中获得稳定表达,证明了HSV-2 gD具有良好的免疫原性,为开发基因工程疫苗奠定了基础。