外泌体介导miR-21-5p诱导巨噬细胞极化促进食管癌转移的研究

来源 :中国环境诱变剂学会风险评价专业委员会第二十届全国学术交流会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaobaiban
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  目的:研究食管癌细胞外泌体中miR-21-5p 对巨噬细胞的极化作用,并探讨其对食管癌转 移的影响,为食管癌的早期发生发展寻找生物标志物,提供基础研究依据. 方法:应用Western blot 检测外泌体标志蛋白的表达;应用Cy3 荧光标记miR-21-5p 验证 巨噬细胞对外泌体中miRNA 的摄取;建立食管癌细胞与巨噬细胞的共培养体系,通过qRT-PCR 验证 miR-21-5p 及M1、M2 型巨噬细胞标志物表达水平;应用共培养后巨噬细胞培养上清作 用与新的食管癌细胞,分别采用transwell 穿膜法,Western blot 检测食管癌细胞的迁移、侵袭能力及EMT 相关分子表达. 结果:诱导人急性单核白血病细胞THP-1 贴壁形成巨噬细胞;共聚焦显微镜拍摄结果显示,Cy3 标记miR-21-5p 可以通过外泌体进入受体细胞中;qRT-PCR 结果显示共培养后,巨噬细 胞(受体细胞)中miR-21-5p 表达水平升高,且M2 型巨噬细胞标志物表达升高(P<0.05); 巨噬细胞上清液作用于EC109 后,发现细胞的迁移、侵袭能力与对照组相比提高(P<0.05),EMT 相关分子检测结果,实验组E-cadherin 蛋白表达水平降低,N-cadherin、snail 蛋白 表达水平升高. 结论:肿瘤细胞分泌外泌体中,高峰度表达的miR-21-5p 可诱导巨噬细胞M2 型极化,进而 促进食管癌细胞的转移,可作为食管癌转移的早期生物标志物.
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