论文部分内容阅读
目的 先天巨结肠症(Hirschsprung disease,HD)也称无神经节细胞症；不同长度肠段肠神经节缺乏,导致无神经节细胞的肠段狭窄,近端肠段扩张；HD 需手术治疗,治疗效果不理想,手术并发症多；目前认为HD 是一种多基因遗传病,RET、GDNF、EDNRB、PHOX2B、SOX10 及SHH 等基因被认为与HD 相关,但只能解释50％的家族病例和大约20％的散发病例；提示HD 发病还涉及其他分子机制。前期在不同人群中的研究提示神经调节蛋白1(Neuregulin 1,NRG1)可能是HD 的易感基因,目前尚无动物实验证实NRG1 与HD 相关性,由于NRG1 在斑马鱼与人类中进化较保守,故本实验选用斑马鱼为模式生物探讨NRG1 在肠神经系统发育中的作用。方法 克隆斑马鱼NRG1 基因,分析多物种NRG1 同源性及进化树；使用原位杂交技术检测NRG1 在成年斑马鱼肠道及斑马鱼胚胎中的表达；通过显微注射方法建立斑马鱼NRG1 敲低、过表达及回补模型,使用原位杂交及免疫荧光技术对比观察斑马鱼表型、肠神经元数目、肠神经发育相关因子的表达及肠神经纤维排列情况。结果 斑马鱼NRG1 与人类NRG1 基因有较高同源性,进化较保守；在成年斑马鱼肠道中,NRG1 主要位于粘膜层,在肌层和浆膜层均未见表达；胚胎中,NRG1 自胚胎早期即开始表达,并表达于幼体的肠道,表达谱与肠神经发育时相及位置相符；敲低NRG1 后,胚胎出现孵出延迟,头部畸形,身体变短,躯体扭曲等表型；NRG1 可影响肠神经元数目,并与肠神经分化、迁移及增殖等过程有关；NRG1 可影响肠神经发育分子标志物ret、gdnf、sox10、phox2b、shh 的表达水平；NRG1 敲低可导致肠迷走神经纤维排列异常。结论 使用斑马鱼这一模式动物研究NRG1 在肠神经发育中的作用,可以间接反映NRG1在人类先天性巨结肠症中的作用；神经调节素1可能影响斑马鱼胚胎发育过程,并可能参与斑马鱼肠神经系统发育过程。