【摘 要】
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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是以妊娠母猪繁殖失败和仔猪出现呼吸困难为特征的传染病,PRRSV是该病的病原体.将PRRSV CH-1a株OR
【机 构】
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中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001
【出 处】
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中国农业生物技术学会动物生物技术分会第二届全国动物生物技术学术研讨会
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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是以妊娠母猪繁殖失败和仔猪出现呼吸困难为特征的传染病,PRRSV是该病的病原体.将PRRSV CH-1a株ORF6基因疏水性较强的区域删除后,克隆于pGEX-6p-1载体中,转化大肠杆菌,并进行诱导表达.经SDSPAGA分析发现,表达了Mr约为37 000的融合蛋白rtM,Western blot分析证实,重组蛋白能被PRRSV抗血清所识别.收获融合表达的rtM,按50μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化后,经腹腔接种BALB/c小鼠,免疫3次后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用rtM作为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,结果获得了1株能稳定分泌抗rtM蛋白抗体的杂交瘤细胞株,将其命名为M2B3.间接免疫荧光检测结果发现,所获得的单克隆抗体能与PRRSV感染细胞产生特异性免疫荧光.亚型鉴定结果显示,单克隆抗体M2B3为IgG1型,其轻链均为κ链.研究获得的融合蛋白rtM及单克隆抗体将为今后深入研究PRRSV病毒结构和功能,分析M蛋白的抗原表位等提供有益帮助.
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