【摘 要】
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高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术是近年来兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法.HRM不受突变碱基位点与类型局限,无需序列特异性探针,在PCR结束后直接运行高分辨熔解,即可完成对样品突变、单核苷酸多态性、甲基化及SNP基因分型等分析.HRM技术主要是根据核酸分子熔解温度和熔解形状的不同来区分样品.在PCR反应时引入饱和的荧光染料EvaGree
【机 构】
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浙江省淡水水产研究所,浙江 湖州,313001;宁波大学海洋学院,浙江宁波,315211 浙江省淡
【出 处】
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第十届长三角科技论坛水产科技分论坛暨2013年浙江省渔业科技论坛
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高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术是近年来兴起的一种全新的突变扫描和基因分型的遗传分析方法.HRM不受突变碱基位点与类型局限,无需序列特异性探针,在PCR结束后直接运行高分辨熔解,即可完成对样品突变、单核苷酸多态性、甲基化及SNP基因分型等分析.HRM技术主要是根据核酸分子熔解温度和熔解形状的不同来区分样品.在PCR反应时引入饱和的荧光染料EvaGreen或LC Green plus,荧光染料在PCR扩增的过程中被嵌入到DNA双链中,采用高分辨率的仪器进行检测,并用专门的软件进行分析,微小的差别就会被检测出来,从而能够成功的筛选出突变基因或进行基因分型.本研究建立了快速进行三疣梭子蟹抗溶藻弧菌相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)分子标记基因分型的方法(PCR-HRM).该方法对三疣梭子蟹抗病相关的C-型凝集素第四外显子205bp处SNP(简称SNP T/C E34-205,下同)位点进行HRM分析,能够对该位点的三种基因型进行快速鉴定.该检测方法在1-2h之内即可完成SNP基因分型,具有高通量、低成本、灵敏、特异性高、真正实现闭管操作防止污染等优势,可用于利用标记辅助选择(MAS)选择有利的基因型个体作为亲本,为培育三疣梭子蟹抗病品系奠定重要的基础.
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