【摘 要】
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目的：通过克隆EV71病毒结构前体蛋白p1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的真核双基因表达载体.方法：设计合成EMCV病毒IRES序列的特异性引物,克隆至真
【机 构】
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深圳市疾病预防控制中心,518055
【出 处】
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第三届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
论文部分内容阅读
目的：通过克隆EV71病毒结构前体蛋白p1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的真核双基因表达载体.方法：设计合成EMCV病毒IRES序列的特异性引物,克隆至真核表达载体pcDNA3.0上,命名为pc-IRES.从手足口病重症患者分离EV71病毒株,经RT-PCR技术分别扩增出EV71病毒的P1前体蛋白区与3CD区的片段,并将其定向克隆至真核表达载体pc-IRES载体中IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠杆菌DH5α中,最后经PCR和双酶切鉴定转化菌落.结果：重组真核双基因表达载体p-IRES-P1-3CD构建成功.结论：成功构建共表达EV71病毒P1前体蛋白(VP1-VP4)和非结构蛋白3CD真核双基因表达载体,这将为下一步制备基于DNA载体的EV71病毒的类病毒颗粒(VLPs)疫苗打下基础.
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