目的:拟在体外建立一种分离纯化、培养扩增、标记骨髓间充质干细胞的方法。方法:密度梯度离心和贴壁培养相结合,分离纯化骨髓问充质干细胞,用BrdU标记骨髓间充质干细胞,并予四甲基偶氮唑盐方法测定标记后细胞活性。台盼蓝染色观察密度梯度离心后细胞活性,倒置相差显微镜下观察兔骨髓间充质干细胞的形态变化;流式细胞仪检测兔骨髓间充质干细胞的表面标记;绘制兔骨髓间充质干细胞生长曲线,骨髓间充质干细BrdU标记率及标记后细胞活性。结果:密度梯度离心结合贴壁法能分离培养出纯度较高的兔骨髓间充质干细胞,分离后细胞活性均大于99%。流式细胞仪检测兔骨髓间充质干细胞CD90,CD45,CD34阳性细胞表达分别为99.24%,0.03%,1.37%。兔骨髓间充质干细胞的生长曲线呈S形。免疫荧光试验检测BrdU标记后,在荧光显微镜下胞核呈绿色荧光,标记率>95%,BrdU标记后,细胞活性高,BrdU细胞标记最佳时间为48h,最佳浓度为10gg/mL。结论:采用淋巴细胞分离液密度梯度离心和贴壁培养相结合,可获得纯度较高骨髓间充质干细胞,是简便可行的方法:BrdU是一种简单、有效的标记骨髓间充质干细胞的方法,BrdU对细胞标记率及安全性高。