【摘 要】
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石油制品的生产和使用过程中,往往会造成大量石油污染物进入土壤、河流和大气而产生严重的环境污染.挖掘高效烷烃降解基因,为后续石油烃污染修复工程提供优良的遗传资源具有重大的现实意义.研究以一株石油烃降解菌TY22为研究对象,对其烷烃羟化酶基因alkB克隆测序,并对其外源表达和功能进行研究.以TY22基因组DNA为模板,PCR扩增得到了TY22菌株烷烃羟化酶alkB基因的部分序列,再采用染色体步移技术获
【机 构】
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西华师范大学生命科学学院 四川南充637009
【出 处】
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第二十次全国环境微生物学学术研讨会
论文部分内容阅读
石油制品的生产和使用过程中,往往会造成大量石油污染物进入土壤、河流和大气而产生严重的环境污染.挖掘高效烷烃降解基因,为后续石油烃污染修复工程提供优良的遗传资源具有重大的现实意义.研究以一株石油烃降解菌TY22为研究对象,对其烷烃羟化酶基因alkB克隆测序,并对其外源表达和功能进行研究.以TY22基因组DNA为模板,PCR扩增得到了TY22菌株烷烃羟化酶alkB基因的部分序列,再采用染色体步移技术获得了该菌株的alkB全序列,并对其序列进行了同源性分析.然后将alkB基因与pET21b(+)载体构建重组质粒,并转入E.coli BL21 (DE3)进行表达.再将alkB基因克隆至pCom8载体中,分别转入E.coli GEc 137(pGEc47ΔB)和Pseudomonas fluorescens KOB2Δ1进行基因功能的互补试验.研究结果表明,染色体步移获得了1236 bp的烷烃羟化酶基因完整CDS序列(GenBank Accession： KU867870) GenBank登录号为：KU867870.经分析,该基因编码一段411 aa的蛋白质,其相对分子量为46.7 kDa,等电点9.22.预测其二级结构,α螺旋占37.47％,β转角占10.71％,无规则卷曲占35.28％,延伸链占16.55％；诱导表达发现,重组菌在0.1 mmol/L IPTG、30℃条件下诱导培养6h的表达效果最佳,得到与预期相符的46 kDa蛋白；基因功能互补试验发现,TY22菌株的烷烃羟化酶能氧化C12～C16的中长链烷烃,并能在大肠杆菌中有效表达.本研究能为后续石油烃污染修复工程提供优良的遗传资源,对石油烃污染的生物修复具有重要的实践意义.
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