【摘 要】
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目的：通过研究不同浓度猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)作用不同时间对猪脾细胞氧化应激水平的影响,确定建立猪脾细胞氧化胁迫体外模型的条件.方法：体外分离培养猪脾细胞,用不同
【机 构】
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广西大学动物科学技术学院,广西,南宁,530005
【出 处】
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中国畜牧兽医学会中兽医学分会第八次全国代表大会暨2014年学术年会
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目的：通过研究不同浓度猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)作用不同时间对猪脾细胞氧化应激水平的影响,确定建立猪脾细胞氧化胁迫体外模型的条件.方法：体外分离培养猪脾细胞,用不同浓度(10-1、10-2、10-3、10-4) PRRSV分别处理不同时间(4 h、8h、12 h、24 h、48h)后,采用MTT法检测细胞存活率;Griess法测定细胞培养上清液中NO含量;加载DCFH-DA探针后荧光酶标仪检测细胞内活性氧自由基水平;荧光光度法测定细胞内还原性谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平;分光光度法测定细胞内黄嘌呤氧化酶(XOD)、髓过氧化物酶(MPO)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)活性.结果：随着病毒浓度的增加及作用时间延长,猪脾细胞存活率下降,NO分泌水平和细胞内XOD、MPO、iNOS活力逐渐升高,细胞内GSH和GSSG含量逐渐增加,GSH/GSSG比值和ROS水平逐渐下降.在10-2PRRSV体外感染猪脾细胞4h条件下,细胞分泌的NO含量极显著高于对照组(P＜0.01),细胞内活性氧水平、GSSG含量、MPO活性和iNOS活性均极显著高于对照组(P＜0.01),GSH/GSSG比值显著低于对照组(P＜0.05),细胞内XOD活力显著高于对照组(P＜0.05),且该条件下细胞有较高存活率(93.15％).结论：PRRSV体外感染猪脾细胞能引起细胞氧化应激,选择10-2PRRSV体外感染猪脾细胞4h是建立猪脾细胞氧化胁迫模型的最佳条件.
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