【摘 要】
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目的:构建NGAL原核表达载体并表达、纯化、鉴定目的蛋白。方法:根据GenBank报道的人NGAL基因序列,采用RT-PCR技术从人肝脏组织总RNA中获得cDNA,经PCR获得NGAL基因片段。将测序正确的目的基因克隆至pSE380载体中,连接产物转化E.coliBL21.诱导重组菌表达目的蛋白,经镍柱亲和层析法纯化并进行Westernblotting鉴定。结果:测序结果证实克隆的目的基因序列与G
【出 处】
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中国医学装备协会第二十五届学术年会
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目的:构建NGAL原核表达载体并表达、纯化、鉴定目的蛋白。
方法:根据GenBank报道的人NGAL基因序列,采用RT-PCR技术从人肝脏组织总RNA中获得cDNA,经PCR获得NGAL基因片段。将测序正确的目的基因克隆至pSE380载体中,连接产物转化E.coliBL21.诱导重组菌表达目的蛋白,经镍柱亲和层析法纯化并进行Westernblotting鉴定。
结果:测序结果证实克隆的目的基因序列与GenBank中的NGAL序列相符。SDS-PAGE结果显示获得分子量约为23kDa的可溶性目的蛋白,Western blotting结果显示目的蛋白可与NGAL抗体发生特异性反应。
结论:在大肠杆菌中获得了人NGAL蛋白的可溶性表达。
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