云南白药对HDPCs OC表达、矿化结节形成、COL-I、BSP mRNA表达的影响

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目的:研究云南白药对人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPCs)对人牙髓细胞表达成骨向(或成牙本质细胞向)分化标志物:Ⅰ型胶原酶(type-Ⅰcollagen,Col-Ⅰ)、骨钙素(osteocalcin,OC)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)及形成矿化结节的影响。方法:第4代HDPCs,空白对照组加入1%FBSα-MEM培养液,阳性对照组加入100ng/ml的BMP-2+1%FBS的α-MEM培养液,云南白药组加入不同浓度的云南白药(1.25μg/ml,2.5μg/ml,5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml)+1%FBS的α-MEM培养液,MTT法检测云南白药对HDPCs增殖作用的影响,根据实验结果选择10μg/ml的云南白药进行HDPCs的成骨向诱导,空白对照组加入矿化诱导液+1%FBS的α-MEM培养液,阳性对照组加入矿化诱导液+100ng/ml的BMP-2+1%FBS的α-MEM培养液,云南白药组加入矿化诱导液+10μg/ml的云南白药+1%FBS的α-MEM培养液,于诱导的第7d取上清行放免检测HDPCs OC的表达,第14d VonKossa染色鉴定HDPCs矿化结节的形成,第3d、7d、14d RT-PCR检测HDPCs Col-Ⅰ、BSP mRNA的表达。结果:VonKossa染色显示云南白药组可形成明显的矿化结节;云南白药组OC的表达量高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),与阳性对照组比较无显著性差异(P>0.05)。与空白对照组比较,云南白药在三个时间点(3d、7d、14d)Col-Ⅰ和BSP mRNA的表达均较高,差异有统计学意义(P<0.05),与阳性对照组比较,云南白药在三个时间点(3d、7d、14d)Col-Ⅰ和BSP mRNA的表达均无明显差异(P>0.05)。结论:10μg/ml的云南白药可促进HDPCs矿化结节的形成及增强OC的表达,并可上调HDPCs Col-Ⅰ及BSP mRNA的表达。
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