【摘 要】
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目的 评价DnaJ作为候选疫苗的保守性及其抗血清的被动保护效果,分析其在不同血清型肺炎链球菌中的表达情况.方法 以D39型肺炎链球菌基因组DNA为模版,利用PCR方法扩增dnaJ
【机 构】
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四川大学华西第二医院检验科成都市人民南路三段20号
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目的 评价DnaJ作为候选疫苗的保守性及其抗血清的被动保护效果,分析其在不同血清型肺炎链球菌中的表达情况.方法 以D39型肺炎链球菌基因组DNA为模版,利用PCR方法扩增dnaJ开放读码框架,采用体外重组法将dnaJ序列克隆到原核表达载体pET-32 (a)内,测序鉴定.利用分子克隆技术将目的蛋白进行体外表达,SDS-PAGE鉴定；DnaJ特异性多克隆抗血清免疫BALB/C小鼠,评价其对致死性肺炎链球菌侵袭的被动保护作用；Western blot方法分析6株不同血清型肺炎链球菌中,DnaJ是否均有表达.结果 纯化的DnaJ蛋白免疫BALB/C小鼠获得高滴度、高特异性的的多克隆抗体,该抗血清对致死性肺炎链球菌的侵袭具有较好的保护作用,Western blot结果显示DnaJ特异性多克隆抗体与6种血清型S.pn的菌体蛋白能够其交叉反应.结论 DnaJ蛋白多克隆抗体被动免疫BALB/C小鼠可以抵御致死性肺炎链球菌的侵袭,DnaJ蛋白在6种常见的肺炎链球菌菌株中均有表达且保守性高,提示DnaJ是一个具有应用前景的S.pn候选蛋白疫苗因子.
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