【摘 要】
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目的:探讨山茱萸环烯醚萜苷(CIG)对微管相关蛋白tau过度磷酸化的抑制作用及其药理机制.方法:细胞模型:实验分为空白对照,CIG空白给药组(200mg/L),CIG小剂量组(50mg/L),CIG中剂量组(100mg/L),CIG大剂量组(200mg/L).MTT法检测神经细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态,western blotting方法检测tau蛋白不同位点磷酸化水平,GSK-3β,GS
【机 构】
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首都医科大学宣武医院药物研究室,北京市老年病医疗研究中心,神经变性病教育部重点实验室,北京 100053
【出 处】
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2013中国药学大会暨第十三届中国药师周
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目的:探讨山茱萸环烯醚萜苷(CIG)对微管相关蛋白tau过度磷酸化的抑制作用及其药理机制.方法:细胞模型:实验分为空白对照,CIG空白给药组(200mg/L),CIG小剂量组(50mg/L),CIG中剂量组(100mg/L),CIG大剂量组(200mg/L).MTT法检测神经细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态,western blotting方法检测tau蛋白不同位点磷酸化水平,GSK-3β,GSK-3β-ser9、GSK-3β-Y216,Akt、p-Akt-ser473,PP2A、DM-PP2A的表达.动物模型,健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,CIG(60mg/kg)给药组,大鼠侧脑室注射WT和GFX制备拟老年性痴呆(AD)模型,假手术组注射等量生理盐水.CIG(60mg/kg)灌胃2周,其余组给予等量双蒸水灌胃;通过水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力;western blotting方法检测各组大鼠皮层及海马tau蛋白不同位点磷酸化水平,GSK-3β,GSK-3β-ser9、GSK-3β-Y216,Akt、p-Akt-ser473,PP2A、DM-PP2A的表达.结果:(1)WT/GFX模型组细胞Akt-ser473和p-GSK-3β-ser9的表达明显降低,从而引起GSK-3β活性增高;WT/GFX模型组细胞PP2A表达无明显改变,但DM-PP2A表达水平显著增高;tau蛋白磷酸化水平在多个位点显著增高.CIG中剂量和大剂量组能够明显降低模型细胞tau蛋白在Thr212,Ser214,Ser396/Ser404,Thr217,Thr205位点的磷酸化水平.(2)OA模型组细胞变圆,突起断裂,细胞存活率显著降低.;GSK-3β表达降低,p-GSK-3β-ser9表达增高;tau蛋白磷酸化水平在多个位点显著增高.CIG给药组Ser199/202、Thr205、Thr212、Thr214、Thr217和Ser396位点磷酸化tau蛋白的表达随药物剂量增加而降低,具有明显的剂量依赖性;CIG给药组PP2A的表达明显升高,DM-PP2A表达显著降低,GSK-3β与p-GSK-3β-ser9表达无明显影响.(3)WT/GFX模型组大鼠水迷宫游出时间延长,GSK-3β-ser9和p-Akt-ser473的表达明显抑制,tau蛋白磷酸化水平在多个位点显著增高.CIG可以缩短模型大鼠寻找平台时间,改善空间记忆能力;降低大鼠脑内tau蛋白在Thr212,Thr205位点的磷酸化水平,增加GSK-3β-ser9、p-Akt-ser473和PP2A的表达,降低DM-PP2A的表达.结论:CIG拮抗tau蛋白在多个位点的过度磷酸化,其主要机制为增加PP2A表达,增强PP2A甲基化修饰,从而提高磷酸酯酶PP2A的活性,促进tau蛋白去磷酸化.CIG通过对tau蛋白过度磷酸化的抑制作用,可明显改善模型动物学习记忆能力,对神经细胞的形态及存活率也有明显改善,在AD治疗中可能具有较好的应用前景.
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