论文部分内容阅读
目的:探讨泛素连接酶RING2 对苯并[a]芘(Benzo(a)pyrene,BaP)染毒人支气管上皮(human bronchial epithelial,16HBE)细胞细胞周期和P53 蛋白表达的影响.方法:以16HBE 未处理组为阴性对照组,二甲基亚砜(DMSO)组为溶剂对照组,MOCK 组为序列对照组.在使用RNA 干扰技术降低泛素连接酶RING2 基因表达前后,分别进行不同浓度BaP(1、2、4、8、16、32μmol/L)染毒24h;16μmol/L BaP 染毒不同时间(1、2、4、8、12、24h)实验.用流式细胞术检测干扰前后两组细胞细胞周期分布情况,用Western-blot法检测干扰前后两组细胞P53 蛋白表达水平.结果:1.流式细胞术检测结果显示:与阴性对照组比较,16HBE 细胞染毒后各浓度和各时点组S 期细胞所占的比例均增加(P<0.05),而16HBE(SiRNA-RING2)各浓度和各时点组S 期细胞所占的比例均下降(P<0.05).经协方差分析,分组因素(是否进行RNAi)和染毒浓度都对S 期细胞比例有影响,P 值均为小于0.001,16HBE(siRNA- RING2)细胞组的修正均数(17.09%)比16HBE 细胞组(31.55%)明显降低(P<0.001).分组因素(是否进行RNAi)和染毒时间都对S 期细胞比例有影响,P 值均为小于0.001,16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(13.07%)比16HBE 细胞组(28.04%)明显下降(P<0.001).2.Western-blot 结果显示:与阴性对照组比较,16HBE细胞染毒后各浓度和各时点组P53 的表达水平均增加(P<0.05),而16HBE(SiRNA-RING2)细胞除16μmol/L 染毒8h 组外,其余各组P53 的表达水平均降低(P<0.05).经协方差分析,分组因素(是否进行RNAi)和染毒浓度都对P53 的表达水平有影响,P 值分别为0.026 和0.028.16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(0.989)比16HBE 细胞组(1.375)明显下降(P<0.01);分组因素(是否进行RNAi)和染毒时间都对P53 的表达水平有影响,P值分别为0.007 和0.035.16HBE(siRNA-RING2)细胞组的修正均数(0.857)比16HBE细胞组(1.541)明显下降(P<0.01).结论:RING2 参与的组蛋白泛素化修饰可能通过影响P53 表达和细胞周期S 期的变化来发挥对DNA 损伤修复的调控.