【摘 要】
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根据猪园环病毒2型(PCV2)基因序列设计一对特异性引物PCR扩增PCV2去核定位信号(nuclear localizationsignal,NLS)的Cap蛋白基因(ORF2),经SphI/HindⅢ双酶切后将其克隆到表达
【机 构】
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河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州 450008
【出 处】
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中国畜牧兽医学会小动物医学分会第四次学术研讨会暨中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十六次学术研讨会
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根据猪园环病毒2型(PCV2)基因序列设计一对特异性引物PCR扩增PCV2去核定位信号(nuclear localizationsignal,NLS)的Cap蛋白基因(ORF2),经SphI/HindⅢ双酶切后将其克隆到表达载体pQE30中并转化大肠杆菌JM109,采用IPTG进行诱导表达,采用自行创新的纯化方法对表达的融合蛋白进行纯化,Western Blot鉴定纯化后的重组Cap蛋白(rCap)活性。结果表明,成功克隆了无核定位信号的ORE2基因,其分子量大小579bp;表达的rCap蛋白大小24-1 kD左右,与预期大小相一致;经纯化后的rCap蛋白纯度在95％以上;Wlestern Blot鉴定结果表明Cap蛋白可以和抗PCV2抗体反应,具有很好的抗原性。本研究为以后进一步建立以Cap蛋白为包被抗原的PCV2间接ELISA诊断方法以及PCV2疫苗的研究等奠定了基础。
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