【摘 要】
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光合细菌Chromatium vinosum可溶性氢酶经5次柱层析(DE-52,TSK-DEAE(Ⅰ),Ultragel AcA-44,TSK-DEAE(Ⅱ),Superdex TM75)分离后被纯化365倍,得率为32℅，其催化放氢的活性为8.4u
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光合细菌Chromatium vinosum可溶性氢酶经5次柱层析(DE-52,TSK-DEAE(Ⅰ),Ultragel AcA-44,TSK-DEAE(Ⅱ),Superdex TM75)分离后被纯化365倍,得率为32℅，其催化放氢的活性为8.4umIH<,2>/min·mg prot.SDS-PAGE结果显示,可溶性氢酶由52kD和21.5kD两个亚基组成.氧化态可溶性氢酶在45K下,产生了典型的Ni(Ⅲ)EPR信号(g<,x,y,z>=2.37,2.16,2.016和g<,x,y,z>=2.30,2.23,2.016);在10K下,没有出现膜结合态氢酶中存在的[3Fe-4S]簇特征EPR信号.可溶性氢酶被H<,2>还原后,Ni(Ⅲ)的特征EPR信号消失,同时出现一个[4Fe-4S]簇的特征EPR信号(g<,x,y,z>=1.88,1.90,2.045).可溶性氢酶小亚基由179个氨基酸残基组成,分子量为21.8kDa,含有NiFe-氢酶保守的序列框:CxxC......GxCxxxG......GCPP.研究结果表明:C.vinosum可溶性氢酶的结构和功能不同于膜结合态氢酶,是一种新的催化放氢的NiFe-氢酶.
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