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目的 分别应用控制性脑皮质撞击仪(CCI)和细胞牵张损伤仪(CIC)建立不同损伤程度颅脑创伤(TBI)大鼠模型和牵张损伤SH-SY5Y细胞模型,探讨亚低温(MIH)对TBI后受体相互作用蛋白(RIP)介导的神经细胞可控性坏死进程的影响.方法 应用电子控制性皮质撞击仪(eCCI-6.3),对大鼠顶叶大脑皮质区分别进行打击速率为4m/s、5m/s和6 m/s的精确撞击,打击时间均为200 ms,打击深度均为2mm.同时应用细胞牵张损伤仪(CIC Ⅱ),对SH-SY5Y细胞分别进行1、2、3次打击,持续时间均为50 ms、气体脉冲压力均为24 PSI(磅/平方英寸).动物设假手术组(仅开骨窗不行撞击),细胞设正常组(不打击).致伤即刻给予亚低温(33℃)干预6h,24 h后采用神经功能缺陷评分(NSS)观察大鼠行为学改变,应用多普勒流量计测定大鼠脑损伤周围区域局部脑血流(rCBF).致伤48 h后处死大鼠,取脑组织行甲苯胺蓝染色观察脑组织缺损程度,HE染色评估脑组织病理学改变,透射电镜观察神经细胞超微结构.另外,应用全息活细胞成像技术实时监测SH-SY5Y细胞牵张损伤后的形态变化,并应用DAPI/PI/Fluoro-Jade C三染法以及流式细胞术检测细胞死亡情况.应用免疫印迹和免疫组织/细胞化学法检测RIP相关蛋白的定位和定量.结果 大鼠脑损伤程度与打击强度相关,打击速率4 m/s模拟轻度TBI、5m/s模拟中度TBI、6rn/s模拟重度TBI.与假手术组比较,TBI各组大鼠神经功能受损,局部脑血流量降低,脑组织神经元皱缩、细胞周围空泡、线粒体结构异常,而且损伤程度随打击速率增强而递增.SH-SY5Y细胞损伤后突触回缩,胞体变圆,细胞面积减小、厚度增加,细胞活力较差.亚低温可明显改善TBI大鼠的细胞受损状态,显著减少SH-SY5Y因牵张损伤后的细胞死亡数量,降低RIP1、RIP3在伤后的异常高表达水平,并显著影响TBI后可控性坏死通路相关蛋白的表达水平,具有显著的神经保护作用.结论 亚低温治疗可有效减少TBI后神经细胞的可控性坏死途径,促进神经功能的恢复.靶向可控性坏死相关蛋白的基因治疗有可能成为一种非常有潜力的治疗手段,对TBI的治疗具有重要意义.