运动性心肌缺血损伤大鼠模型的制备与评价

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目的:本研究将通过观察大鼠心肌细胞HE染色病理切片、生化病理指标、细胞凋亡等指标,分析大鼠在不同强度,不同时间的力竭运动中的心肌损伤程度,建立运动性心肌缺血损伤大鼠模型,以期提供简单可重复性的心肌缺血损伤模型,同时也为运动性心肌缺血损伤研究提供一些依据。方法:本实验以六周龄清洁级健康SD大鼠为研究对象,随机将其分为12组,即安静对照组(X)、高强度力竭运动一次组(A)、高强度力竭运动三次组(B)、高强度力竭运动一周组(C)、高强度力竭运动二周组(D)、高强度力竭运动三周组(E)中强度力竭运动一次组(F)、中强度力竭运动三次组(G)、中强度力竭运动一周组(H)、中强度力竭运动二周组(I)、中强度力竭运动三周组(J)、异丙肾上腺素(ISO)药物模型对照组(M),每组6只,组间体重无差异,高强度为30m/min,0度,中强度为20m/min,0度,运动至大鼠力竭,记录时间,HE病理切片分析心肌结构损伤、比色法检测血清心肌损伤、RT-PCR检测心肌细胞凋亡。结果:1)心肌HE染色检测结果显示随着运动时间的延长损伤程度越来越严重,且高强度运动组比中强度运动组损伤程度更严重,高强度力竭运动需训练三周才达到ISO模型组的损伤程度,其余各组需要更长的时间才能达到心肌缺血损伤;2)大鼠血清cTn-I活性:ISO模型对照组显著性高于安静对照组,力竭性运动各组与安静对照组比较:高强度一周组显著性高于安静对照组,中强度二周组、中强度三周组、高强度二周组、高强度三周组极显著性高于安静对照组,力竭性运动各组与ISO模型对照组比较:中强度一次组、中强度三次组、高强度一次组、高强度三次组显著性低于ISO模型对照组,且从力竭性运动一周组开始,各运动组的LDH活性与ISO模型对照组无显著性差异,中强度二周组、中强度三周组、高强度二周组、高强度三周的LDH活性超过ISO模型对照组,高强度组比中强度组更明显;3)ISO模型对照组与安静对照组比较:Bcl-2基因表达极显著性低于ISO模型对照组,Bax基因表达极显著性高于ISO模型对照组,Bcl-2/Bax比值极显著性低于安静对照组,力竭运动各组与安静对照组比较:Bcl-2基因表达中中强度三次组显著性低于安静对照组,其余各运动组极显著性低于安静对照组,Bax基因表达中各运动组极显著性低于安静对照组,Bcl-2/Bax比值各运动组极显著性低于安静对照组,力竭运动各组与ISO模型对照组比较:Bcl-2基因表达中除了高强度三周组无显著性变化,其余各运动组都极显著性高于ISO模型对照组,Bax基因表达中中强度三周组极显著性低于ISO模型对照组,高强度三周组极显著性高于ISO模型对照组,中强度二周组显著性低于ISO模型对照组,高强度一周,高强度二周显著性高于ISO模型对照组,Bcl-2/Bax比值高强度三周组极显著性低于ISO模型对照组,高强度二周组显著高于ISO模型对照组,其余各运动组极显著性高于ISO模型对照组。结论:1)运动性心肌缺血损伤模型可用中强度、高强度的力竭运动进行建模,且高强度组比中强度组的损伤程度要严重,所需时间更短。以中强度进行三周的力竭运动、高强度进行二周的力竭运动即可达到ISO诱导大鼠心肌损伤的程度,中强度力竭运动三周开始、高强度力竭运动二周开始的运动模型都可作为运动性心肌缺血损伤模型。2)HE病理分析、血清cTn-I、细胞凋亡调控基因等指标在相同建模时间内,高强度力竭运动比中强度力竭运动大鼠的心肌损伤要严重,在更短时间内就能达到ISO模型对照组的损伤程度,且心肌血清酶谱检测比HE染色检测能更早检测出心肌损伤,心肌形态结构损伤出现病变比心肌血清酶谱要靠后。HE病理分析、cTn-I可作为建立运动性心肌缺血损伤模型的评估指标,细胞凋亡调控基因也可作为参考指标,但不是最灵敏的指标。
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