初级听皮层bcl-2高表达对老年性聋的听力保护作用

来源 :第九次全国听力学及嗓音言语医学暨第六次全国人工听觉技术学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chinaoristand
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  目的 构建促进初级听皮层bcl-2高表达载体转染老年性聋动物模型C57BL/6j小鼠听皮层,通过观察触及听皮层细胞凋亡及听力变化,探讨抑制初级听皮层bcl-2表达对初局部细胞凋亡抑制作用及高频听阈的保护作用.方法 选择8月龄C57BL/6j小鼠随机分为三组(对照组,感染2周组,感染1月组),构建携带抑制bcl-2基因的重组腺病毒载体,通过立体定向注射方法注射至C57BL/6j小鼠初级听皮层区域,制备Ad-bcl2载体感染后2周、1月的C57BL/6j小鼠检测各组小鼠听性脑干反应阈值,观察感染不同时间段,小鼠的ABR反应阈变化.电镜下观察初级听皮层组织细胞中携带Ad-bcl-2绿色荧光.RT-PCR、蛋白免疫印迹方法检测Ad-bcl-2感染小鼠初级听皮层bcl-2基因及蛋白表达差异.原位缺口末端标记染色方法检测Ad-bcl-2感染不同时间段初级听皮层组织中能细胞凋亡情况.结果 通过立体定向注射技术将Ad-bcl-2注射初级听皮层组织后2周、1月,感染2周组小鼠ABR反应阈值与正常对照组小鼠无明显差异,感染1月组小鼠ABR反应阈值高于正常对照组,平均反应阈值差异约为10dB.观察Ad-bcl-2感染小鼠初级听皮层2周、1月后,注射区域部分细胞表达重组腺病毒载体携带的绿色荧光.RT-PCR及蛋白免疫印迹方法检测初级听皮层组织细胞中bcl-2基因及蛋白表达量高于正常组小鼠;Ad-bcl-2感染初级听皮层组织1月后,注射区域细胞bcl-2基因及蛋白表达量与正常组小鼠无明显差异.凋亡实验证实Ad-bcl-2感染小鼠初级听皮层2周后,注射区域细胞计数与正常对照组小鼠无明显统计学差异,感染1月组小鼠初级听皮层注射区域凋亡细胞计数高于正常对照组.结论 立体定向注射技术能协助重组腺病毒载体感染局部组织细胞,并在一段时间内进行有效表达.促进初级听皮层细胞中bcl-2高表达,能有效减少注射区域细胞凋亡数,对老年性小鼠听力具有保护作用.Ad-bcl-2载体感染1月时,实验所观察bcl-2基因及蛋白表达、小鼠反应阈值均不如感染半月组小鼠实验结果理想,可能与小鼠机体免疫排斥密切相关.
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