【摘 要】
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目的：构建表达重组胸腺素α1(Tα1)的pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌。方法：将人工合成的Tα1序列进行PCR扩增,将扩增的片段和pMAL-C2x质粒载体分别经BamHI和EcoR I双酶切后,用T4
【机 构】
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LaboratoryAnimalCenter,InstituteofSurgeryResearch,DapingHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chon
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目的：构建表达重组胸腺素α1(Tα1)的pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌。方法：将人工合成的Tα1序列进行PCR扩增,将扩增的片段和pMAL-C2x质粒载体分别经BamHI和EcoR I双酶切后,用T4 DNA快速连接酶连接构建pMAL-C2x-Tα1融合表达质粒,再经测序正确后,将重组体转化至大肠埃希菌TB1菌中,pMAL-C2x-Tα1/TB1菌在LB液体培养基中培养,经IPTG诱导表达麦芽糖结合蛋白与Tα1的融合蛋白(MBP-Tα1),采用Westernblot对MBP-Tα1进行鉴定。结果：pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌能有效表达MBP-Tα1,融合蛋白占菌体蛋白的33.6％,分子量约为45×103.结论：工程菌的成功构建和表达为重组Tα1的纯化、生物学活性等研究奠定了基础。
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