【摘 要】
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目的 建立人端粒保护蛋白1(protection of telomeres 1,POT1)多态性(rs1034794)的检测方法。方法 应用创造酶切位点法(Created Restriction SitePCR,CRS- PCR)根据单碱基
【机 构】
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河南省职业病防治研究院劳动卫生科,郑州 450052
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目的 建立人端粒保护蛋白1(protection of telomeres 1,POT1)多态性(rs1034794)的检测方法。方法 应用创造酶切位点法(Created Restriction SitePCR,CRS- PCR)根据单碱基突变位点的碱基替代情况设计PCR 引物,其中一条引物根据突变位点邻近序列设计,人为引入错配碱基,使得引物3’端和单碱基突变的一种突变型在PCR 扩增后形成一个酶切位点,PCR 产物用PCR-RFLP(PCR Restriction Fragment Length Polymorphism)法进行分析。结果 设计一对特异引物,其中正向引物3’末端与多态相邻,倒数第三位碱基为错配碱基A可在PCR 扩增后与多态T等位基因及相邻片段形成AGCT结构,使用限制性内切酶AluI 酶切效果较好。结论 应用CRS-PCR方法创造的酶切位点可以有效而简捷地检测POT1(rs1034794)基因多态性。
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