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目的：建立超快速液相色谱-串联质谱法(UFLC-MS/MS)测定呋塞米的方法。方法：样品以0.4％氢氧化钠溶液提取、微孔滤膜滤过、离心后，通过电喷雾离子化(ESI)，采用多反应检测(MRM)方式进行负离子检测，用于定量分析的检测离子为m/z 328.8-284.6。采用shim-pack XR-ODS(3.0mm×75mm，2.0μm)柱分离，以乙腈-水-甲酸(60：40：0.1,v/v/v)为流动相，流速为0.40mL·min-1。结果：在3min内完成呋塞米定量分析，线性范围为0.25-100 ng·mL-1,最低检测限为0.25ng·mL-1；日内、日间测定的相对标准偏差分别小于2.13％、2.68％。结论：本方法重复性好，灵敏度高，分析速度快，操作简单，可作为呋塞米制剂中呋塞米质量控制方法及血浆样品的测定，适用于药物代谢动力学研究。