【摘 要】
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嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶和溶血素是该菌重要的致病因子与保护性抗原。致病性嗜水气单胞菌TPS-30 株为江浙一带鱼类暴发病病原主要血清型O：9的代表株。本研究利用PCR 方法扩增嗜水气单胞菌TPS-30 株的丝氨酸蛋白酶基因（Spe）和溶血素基因（Hly），将基因Spe 和Hly 通过柔性片段进行融合，并将融合片段插入 pET32a的多克隆位点，构建成重组融合表达载体pET32a-Spe-Hly。将
【机 构】
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浙江省淡水水产研究所，浙江湖州 313001
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嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶和溶血素是该菌重要的致病因子与保护性抗原。致病性嗜水气单胞菌TPS-30 株为江浙一带鱼类暴发病病原主要血清型O：9的代表株。本研究利用PCR 方法扩增嗜水气单胞菌TPS-30 株的丝氨酸蛋白酶基因（Spe）和溶血素基因（Hly），将基因Spe 和Hly 通过柔性片段进行融合，并将融合片段插入 pET32a的多克隆位点，构建成重组融合表达载体pET32a-Spe-Hly。将重组载体转化大肠杆菌BL21（DE3），经异丙醛-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，获得融合蛋白Spe-Hly。表达产物经SDS-PAGE 检测，显示与预期大小约130kD 相吻合的融合蛋白带。将融合蛋白纯化并对鲫鱼进行免疫攻毒试验。结果表明，丝氨酸蛋白酶和溶血素融合表达载体构建成功，并成功获得了融合蛋白Spe-Hly，对鲫鱼的免疫保护率达81．4[％]。这为基因工程亚单位多价疫苗的开发提供基础。
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