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动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是一种严重危害人类生命和健康的疾病,在我国的死亡率也呈逐年上升的趋势。健康状态下平滑肌细胞位于血管壁中层,保持血管壁张力,并且通过改变血管腔的大小来调节身体或器官的血流量。当血管受到损伤时,内皮细胞首先发生变化,继而单核细胞、巨噬细胞发生堆积,并产生各种生长因子。这一系列的变化刺激位于中膜的平滑肌细胞发生表型转化,由收缩性转变为合成型,并且伴随着细胞功能的改变。随着病变过程的逐渐发展,平滑肌细胞发生增殖并向血管内膜迁移,吞噬过量脂质变为泡沫细胞,最终导致动脉粥样硬化斑块的形成。因此血管平滑肌细胞的异常增值和迁移是动脉粥样硬化发病的重要因素。在AS发生发展的过程中,动脉壁和浸润性炎症细胞中均可检测到高表达的血小板衍生因子(Platelet derived growth factor,PDGF),PDGF是一种较强的促有丝分裂剂和化学趋化剂,能够促进平滑肌细胞的增殖与迁移。在正常动脉中无表达,当血管受损深达中膜时,其被大量分泌,释放入血,并与其受体结合,促进平滑肌细胞由中层向内层的迁移。近年来miR NA通过靶基因调控细胞增殖和迁移的机制成为非编码RNA研究领域的热点讨论问题。研究目的:本研究拟通过培养人主动脉平滑肌细胞系、大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5)和大鼠原代胸主动脉细胞来探索miR-92a及其靶基因KLF4对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响。方法:(1)利用Boyden Chamber和CCK8方法检测PDGF刺激下miR-92a对Ao SMC增殖迁移的影响;(2)利用CCK8方法检测miR-92a靶基因哺乳动物转录因子4(KLF4)对AoSMC增殖的影响;(3)运用Boyden Chamber方法检测KLF4对A7r5及原代大鼠胸主动脉平滑肌细胞(Rat Aortic Smooth Muscle Cells)迁移的影响;(4)运用细胞免疫荧光技术分析miR-92a对AoSMC细胞伪足伸出情况和KLF4的表达情况。结果(:1)PDGF-BB(10 ng/mL)可以明显促进Ao SMCs的迁移,Anti-miR-92a能够明显抑制PDGF-BB诱导的Ao SMC的迁移,而Pre-miR-92a对AoSMC的迁移影响不大。miR-92a可以促进Ao SMCs的迁移;(2)CCK8细胞增殖试验表明,与对照组相比,siK LF4处理组Ao SMC的增殖明显增强;(3)Boyden Chamber细胞迁移试验表明,siKLF4处理组A7r5的迁徙明显增强,同样在原代大鼠胸主动脉平滑肌细胞(Rat Aortic Smooth Muscle Cells)中也观察到了相同的实验现象;(4)转染Anti-miR-92a的Ao SMC在PDGF-BB(10ng/mL)刺激下伪足伸出较对照组明显减少,KLF4表达升高。表明miR-92a可以通过KLF4调控AoSMC应力纤维重构。结论:本研究表明,miRNA-92a通过靶基因KLF4调节血管平滑肌细胞的增殖与迁移。