【摘 要】
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目的 构建大鼠离子通道相关蛋白(FXYD5)基因真核表达载体,研究其对大鼠肾小管上皮细胞的体外作用.方法 以含FXYD5全长cDNA的pBluescript Ⅱ KS(+/-)载体为模板,并用PCR方法扩增,将其连接于真核表达质粒pcDNA3.1(+),PCR、双酶切和测序鉴定后,用脂质体包裹转染大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),转染重组真核表达载体为实验组(PF组),转染空质粒PCDNA3.
【机 构】
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温州医学院附属第一医院心内科 325000 温州医学院心血管生物和基因研究所 温州医学院基础学院机
【出 处】
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第五届钱江国际心血管病会议暨2011浙江省心血管病年会
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目的 构建大鼠离子通道相关蛋白(FXYD5)基因真核表达载体,研究其对大鼠肾小管上皮细胞的体外作用.方法 以含FXYD5全长cDNA的pBluescript Ⅱ KS(+/-)载体为模板,并用PCR方法扩增,将其连接于真核表达质粒pcDNA3.1(+),PCR、双酶切和测序鉴定后,用脂质体包裹转染大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),转染重组真核表达载体为实验组(PF组),转染空质粒PCDNA3.1(+)为阴性对照组(NC组)和未做处理的为空白对照组(BC组).通过半定量RT-PCR和real-time PCR定量检测FXYD5的表达水平.并研究该基因对肾小管上皮细胞膜Na+-K+-ATPase活性、细胞增殖能力的影响.结果 RT-PCR、双酶切和测序证明,重组的真核表达载体pcDNA3.1(+)-FXYD5构建成功,PF组FXYD5的表达水平跟BC组相比上调9.645倍,PF组的细胞膜Na+-K+-ATPase活性高于BC组和NC组(P＜0.05)、细胞增殖能力高于NC组(P＜0.05),但与BC组无统计学差异.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-FXYD5,并在NRK-52E细胞中使FXYD5基因的表达水平增加,且增强NRK-52E细胞膜的Na+-K+-ATPase活性和细胞增殖能力.初步对FXYD5基因的功能做了研究,从而推断FXYD5很有可能是高血压病新的致病基因之一.
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