细粒棘球蚴TSP6基因的克隆、表达及重组蛋白反应原性研究

来源 :中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:soloviola
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细粒棘球蚴病(Echinococcosis)是由细粒棘球绦虫的中绦期幼虫-细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)寄生于人、畜脏器内所引起的一种严重危害人们健康和畜牧业发展的人畜共患寄生虫病,导致重要的公共卫生和经济问题。现有的研究发现,四跨膜蛋白(Tetraspanin,TSP)与其他细胞表面受体和胞内蛋白质间相互联系,TSP的表达对细胞黏附、信号传导、移动、迁移、侵袭和转移等具有重要影响,也与宿主-寄生虫之间的相互作用和免疫逃避密切相关。本研究根据GenBank中发表的绵羊TSP6(EG 00715)基因序列,设计特异性引物,提取Eg原头蚴RNA,并进行Eg TSP6基因的RT-PCR扩增、克隆和测序,对TSP6基因及其编码蛋白进行了生物信息学分析;在此基础上,将其亚克隆至表达载体pET-28a(+)中,构建pT-TSP6原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot对目的蛋白进行检测。序列测定与分析表明,Eg TSP6基因cDNA全长为666bp,编码221个氨基酸,该多肽含有5个N端酰基化位点,1个酪氨酸激酶磷酸化位点,与Eg标准株TSP6基因序列(EG00715)同源性为98.18%,其推导的氨基酸序列同源性为85.07%。SDS-PAGE分析结果显示,表达产物的分子质量约为32kDa;Westem-blot分析结果表明TSP6重组蛋白能特异性识别细粒棘球蚴阳性血清,证明此蛋白具有良好的反应原性。TSP是一类高度保守的疏水蛋白,存在于许多真核生物中,具有四段高度疏水的跨膜结构域,N端和C端都在胞质内,其中C端可与胞内的信号分子相连接,细胞外的2个EC环(SEC和LEC)可结合胞外的蛋白及配体。本试验在大肠杆菌中成功表达了TSP6,为进一步研究TSP6蛋白在绵羊细粒棘球蚴病诊断中的潜在使用价值奠定了基础。
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