【摘 要】
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目的：克隆小鼠成纤维细胞生长因子6(FGF6)基因cDNA的读码框(CDS),构建携带FGF6基因的重组真核表达载体，并将重组质粒转染至心肌细胞系H9C2细胞中进行表达，测定转染后FGF6基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法：从小鼠心脏组织提取总RNA，通过RT-PCR得到总cDNA,PCR法扩增，产物连接pGEM-T Easy载体测序分析正确后，再以PCR方法扩增，将其连接入真核表达质粒PIRE
【机 构】
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杭州师范大学附属医院心内科;温州医学院附属第一医院 温州医学院附属第一医院
【出 处】
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中华医学会第十五次全国心血管病学大会
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目的：克隆小鼠成纤维细胞生长因子6(FGF6)基因cDNA的读码框(CDS),构建携带FGF6基因的重组真核表达载体，并将重组质粒转染至心肌细胞系H9C2细胞中进行表达，测定转染后FGF6基因对心肌细胞增殖及凋亡的影响。方法：从小鼠心脏组织提取总RNA，通过RT-PCR得到总cDNA,PCR法扩增，产物连接pGEM-T Easy载体测序分析正确后，再以PCR方法扩增，将其连接入真核表达质粒PIRES2-DsRed2。以PCR、双酶切和测序鉴定正确后，将重组载体PIRES2-DsRed2-FGF6用脂质体包裹转染大鼠心肌细胞(H9C2),RT-PCR法检测转染后FGF6 mRNA表达水平，荧光显微镜观察转染效率。CCK-8法检测转染后细胞增殖能力;以血清饥饿诱导心肌细胞凋亡，同时进行FGF6质粒转染，Western blot方法检测活化Caspase-3表达。结果:成功克隆了小鼠FGF6基因cDNA，重组真核表达载体PIRES2-DsRed2-FGF6构建成功，且证实转染后大鼠心肌细胞的FGF6 mRNA表达明显高于空白对照组(P<0.05)及空质粒组(P<0.05)，转染FGF6基因能提高心肌细胞的增殖能力(P<0.05)，FGF6基因能明显抑制血清饥饿引起的活化Caspase3表达(P<0.05)。结论:成功克隆了FGF6基因，并构建了真核表达载体PIRES2-DsRed2-FGF6，能够在H9C2细胞中获得有效过表达，并证实FGF6基因可促进心肌细胞的增殖及保护心肌细胞的凋亡，故推测其促细胞增殖，抗凋亡功能可能是其参与胚胎心脏发育的机制之一，这为进一步探讨FGF6基因的生物学功能奠定了基础。
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