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目的NGR肽（CNGRC）能与肿瘤血管内皮细胞表达的CD13异构体特异结合,以NGR肽为靶向分子具有分子量小、靶点特异的优点;力达霉素（lidamycin,LDM）是强效的抗肿瘤抗生素,由辅基蛋白（LDP）和活性发色团（AE）构成。本研究制备NGR肽与力达霉素的强化融合蛋白NGR-LDP-AE,并研究其体内外抗肿瘤活性。方法PCR扩增获得含信号肽pelB、NGR肽和LDP编码序列的融合基因,将融合基因克隆到表达载体,转化大肠杆菌。融合蛋白NGR-LDP的N端加入分泌信号肽,C端加入His-tag标签。IPTG诱导融合蛋白的表达,硫酸铵沉淀发酵液,Ni-NTA柱亲和纯化融合蛋白。冷甲醇抽提LDM发色团,与融合蛋白体外组装,分离纯化获得强化融合蛋白;测定A280/A340,计算组装效率。ELISA检测融合蛋白与CD13+细胞的结合特性;MTT检测强化融合蛋白的细胞毒活性;人纤维肉瘤HT-1080细胞接种裸鼠,取瘤组织石蜡切片,免疫组化检测融合蛋白与肿瘤血管的结合特性;小鼠皮下移植性肝癌H22模型检测强化融合蛋白的体内抗肿瘤活性,测定瘤体积计算抑瘤率,并观察动物的生存期。结果构建了融合蛋白NGR-LDP的表达载体,融合蛋白以可溶形式分泌到培养基中,纯化后每升发酵液可获得纯度在95%以上的融合蛋白约20mg,发色团组装效率约为65%。ELISA结果显示融合蛋白与体外培养的CD13+细胞有较强的结合。强化融合蛋白NGR-LDP-AE对体外培养的肿瘤细胞有强烈的杀伤作用,对人纤维肉瘤HT-1080细胞和人乳腺癌MCF-7细胞的IC50值为1.94×10-9M和2.67×10-9M。免疫组化表明NGR-LDP能与肿瘤血管特异结合,结合模式与CD13类似;而不含NGR肽的辅基蛋白结合较弱。体内实验显示强化融合蛋白对小鼠皮下移植性肝癌H22有显著抑制作用,接种16天后0.8mg/kg剂量组的强化融合蛋白抑瘤率达94.8%,显著强于0.05mg/kg（耐受剂量）游离力达霉素（66.9%）;动物的生存期得到显著延长,中位生存时间由27天延长至58天。结论获得了分泌表达的NGR肽与力达霉素辅基蛋白的融合蛋白NGR-LDP,融合蛋白能与肿瘤血管特性结合;强化融合蛋白NGR-LDP-AE的抗肿瘤活性强于游离力达霉素,可望成为一种小型化、高效化的靶向抗肿瘤药物。