【摘 要】
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Crustin 是一种富含半胱氨酸的小分子抗菌肽,C 端含有一个WAP 结构域,在甲壳动物的先天免疫系统中发挥重要作用.本研究从三疣梭子蟹的鳃中提取总RNA,通过RT-PCR 得到PtCrustin2 的成熟肽基因,并分别在其5和3端引入EcoRⅠ和NotⅠ限制性内切酶位点,然后将目的片段与表达载体pPIC9K 连接,构建重组表达载体pPIC9K-mPtCrustin2,电转入毕赤酵母GS115
【机 构】
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上海海洋大学 食品学院,上海201306
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Crustin 是一种富含半胱氨酸的小分子抗菌肽,C 端含有一个WAP 结构域,在甲壳动物的先天免疫系统中发挥重要作用.本研究从三疣梭子蟹的鳃中提取总RNA,通过RT-PCR 得到PtCrustin2 的成熟肽基因,并分别在其5和3端引入EcoRⅠ和NotⅠ限制性内切酶位点,然后将目的片段与表达载体pPIC9K 连接,构建重组表达载体pPIC9K-mPtCrustin2,电转入毕赤酵母GS115 细胞后,以不同浓度梯度的G418 筛选高拷贝酵母转化子,经过0.5%甲醇诱导表达,获得重组PtCrustin2 成熟肽并对其进行分离纯化.Tricine-SDS-PAGE 分析表明目的条带约10.5 kDa.本研究首次实现了三疣梭子蟹PtCrustin2 成熟肽在毕赤酵母中的重组表达,为后续进一步研究奠定了基础.
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