DNA发夹引发滚环扩增和纳米金组装反应用于检测赭曲霉毒素A

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赭曲霉毒素A(OTA)是赭曲霉菌在生长代谢过程中产生的一种代谢物质。许多粮食在存储的过程中极易被这种生物毒素所污染,同时极少量的该物质通过摄食对人体产生较强的神经毒性和致畸性[1]。基于电感耦合等离子体质谱法在测定痕量元素方面有着较为优异的性能,以及核酸适配体识别目标分子产生结构变化等特点,拟通过核酸适配体的结构改变以及功能化的金属纳米材料的组装,发展一种将OTA的响应信号转化为金属纳米材料的信号并采用ICP-MS方法测定OTA含量的方法。我们首先设计一种含有OTA适配体序列,滚环扩增识别序列以及亲和作用序列的DNA发夹结构。在该发夹的5‘端修饰有生物素分子以便它可以通过生物素-链酶亲和素的作用偶联到磁球表面;而与纳米金颗粒所修饰的DNA单链形成碱基互补配对的序列则被设计在滚环扩增的环形模板链中[2]。一旦体系当中的发夹DNA识别OTA便会导致发夹结构的破坏,原本茎的双链结构被解旋形成单链结构。该单链发生碱基互补环状模板之后,则充当滚环扩增的引物链。在Phi29 DNA聚合酶和dNTPs存在情况下引发DNA滚环扩增反应,从而得到一条具有重复单元的DNA长链。该长链结构含有多个与修饰在纳米金颗粒上的DNA单链发生碱基互补配对的序列单元,溶液中游离的纳米金则被捕获在磁球表面,从而形成磁球-DNA-纳米金复合结构。我们便可以通过测定该复合结构中金元素的含量间接测定样品中OTA含量。由于该复合结构可以通过磁分离作用将其从纳米金溶液中分离出来,从中减小非特异性结合导致的背景增加。同时,滚环扩增反应的引入使得该方法可以检测到较低浓度(皮摩尔)的OTA。
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