猪圆环病毒2型Cap蛋白间接ELISA诊断方法的建立和应用

来源 :中国畜牧兽医学会小动物医学分会第四次学术研讨会暨中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十六次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangyongqiangis250
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以纯化的原核表达的猪圆环病毒2型(PCV2)重组结构蛋白(rCap蛋白)为包被抗原,建立PCV2间接ELISA诊断方法;对最适包被抗原浓度、待检血清稀释浓度、重组抗原包被条件、封闭液的筛选、阴阳性临界值等条件进行了优化;对优化后的ELISA检测方法进行特异性试验、临床应用实验;组装试剂盒并进行试剂盒保存期试验。结果:优化反应条件后确定的抗原最适包被浓度为2.815μg/mL,抗原最佳包被时间为37℃ 2h:血清最适稀释度1:40,酶标抗体最适稀释度为1:500,最佳封闭液为1%的BSA;阴阳性临界值判定标准OD450≥0.33,判为阳性,OD450<0.33,则判为阴性。特异性试验结果表明只有PCV2阳性血清反应后的OD450>0.33,包括抗PCV1阳性血清在内的其他5种抗血清反应后的OD450<0.33,说明所建立的ELISA方法具有良好的特异性。经对临床疑似PCV2感染的100份血清样品进行检测,阳性检出率为69%。组装试剂盒在4℃至少可保存12个月以上,说明所建立的诊断方法可以在生产中大量推广应用。本研究成功建立了能特异性检测抗PCV2血清抗体的ELISA检测方法。
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