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通过考察发酵过程中溶氧、搅拌速度、通气量、接种量以及诱导剂丙烯腈对腈水合酶发酵的影响，确立了5L 发酵罐的批式发酵条件：发酵初始pH 为7.2，发酵温度28℃，菌体的接种量为10﹪，根据菌体生长和产酶特性，采用恒温变速培养，转速由初始200rpm 逐渐调至500rpm，通气量为1.0vvm，发酵过程中溶氧控制在30％以上，有利于菌体快速生长和产酶。诱导剂丙烯腈可以显著提高酶活，结果表明最佳产酶期为52-60h，与对照相比提前了24h。在最佳培养基和最优发酵条件下每毫升发酵培养液酶活力达9500U，是初始酶活的20 倍。