【摘 要】
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为构建和稳定表达鸡白介素18(chicken interleukin-18,ChIL-18)的CHO-K1细胞系,采用RT-PCR方法从鸡的外周血淋巴细胞中扩增到IL-18基因,将编码成熟ChIL-18的基因克隆至原
【机 构】
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Laboratory Animal Center of Harbin Veterinary Research Institute, State Key Laboratory of Veterinary
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为构建和稳定表达鸡白介素18(chicken interleukin-18,ChIL-18)的CHO-K1细胞系,采用RT-PCR方法从鸡的外周血淋巴细胞中扩增到IL-18基因,将编码成熟ChIL-18的基因克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建原核重组质粒并转化至大肠杆菌中诱导表达,用表达的重组蛋白制备兔抗ChIL-18血清.同时将全长基因定向克隆于真核表达载体pEGFP-N1中,经双酶切及测序鉴定,获得重组质粒pEGFP-ChIL-18.用该质粒转染CHO-K1细胞,经G418加压筛选,对转染的阳性细胞进行纯化,获得稳定表达ChIL-18蛋白的CHO-K1细胞系.以间接免疫荧光及western blot鉴定ChIL-18的表达状况,结果表明,重组ChIL-18蛋白在CHO-K1细胞中能够有效表达.该细胞系的建立为体外研究ChIL-18生物学功能提供了平台.
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