牛支原体(Mycoplasma bovis)是一种能够导致牛发生多种疾病,且感染率极高的病原,2013年11月宁夏某牛场成年奶牛出现以肺炎、乳房炎及犊牛出现重呼吸困难、关节炎等为主要特征的病例,发病的犊牛和成年奶牛使用青霉素、氨苄西林、四环素、头孢类抗生素、柴胡、安乃近等药物治疗,元明显效果.结合病史、病理剖检及实验室初步诊断,怀疑为牛支原体感染.分离培养的菌落在40倍显微镜下呈"油煎蛋"样菌落,将分离到的3株可疑菌株纯培养后,使用牛支原体特异性引物和支原体16S rRNA通用引物扩纯培养物并测序,测序结果显示3个分离株以16 SrRNA通用引物扩增后测序结果与GenBank中登陆的牛支原体HuBei-1同源性最高,分别为100.00％、99.86％、99.86％,与无乳支原体的同源性分别为99.51％、99.38％、99.38％,三个分离株之间的同源性达到99.93％.3个分离株以牛支原体特异性引物扩增后测序结果与牛支原体的同源性分别为99.81％、99.68％、99.80％,与无乳支原体的同源性分别为82.45％、82.48％、82.48％.结果分析证实所分离菌株为牛支原体.同时采用MEGA6.0软件,使用N-J法对3个分离株的16 SrRNA序列与支原体代表菌株建立系统发育树,该系统发育树表明3个分离株与国际上的牛支原体代表菌株PG45亲缘关系最近,3个分离株为牛支原体而不是元乳支原体,与特异性PCR扩增结果相同.将分离到的牛支原体菌株同牛支原体国际标准菌株和本实验室保存的7株牛支原体菌株进行亲缘性分析.同时采用ELISA诊断试剂盒对该地区12个规模化奶牛场的230份奶牛血清进行牛支原体血清学调查,结果显示牛群平均阳性率26.52％,牛场阳性率高达100％,表明牛支原体病在该地区呈流行趋势,亲缘性分析发现宁夏地区奶牛分离到的牛支原体元明显的时间性和地域性差别趋势.