【摘 要】
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(目的)鸡球虫生活史复杂,分为有性生殖阶段和无性生殖阶段,生活周期中蛋白表达谱有较大差异,其单一蛋白的基因工程疫苗仅具有部分保护力。因此本研究旨在构建鸡柔嫩艾美耳球虫不同抗原蛋白部分基因真核表达质粒以期为鸡球虫串联多表位活载体疫苗的研究奠定基础。(方法)利用基因功能预测软件,对已报道的具有较好免疫原性的Et MIC 2、Et MIC 3、EtAMA 1进行抗原表位的预测,截选抗原表位集中的基因片段
【机 构】
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山东农业大学,动物科技学院,山东,泰安 271018 山东农业大学,动物科技学院,山东,泰安 27
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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(目的)鸡球虫生活史复杂,分为有性生殖阶段和无性生殖阶段,生活周期中蛋白表达谱有较大差异,其单一蛋白的基因工程疫苗仅具有部分保护力。因此本研究旨在构建鸡柔嫩艾美耳球虫不同抗原蛋白部分基因真核表达质粒以期为鸡球虫串联多表位活载体疫苗的研究奠定基础。(方法)利用基因功能预测软件,对已报道的具有较好免疫原性的Et MIC 2、Et MIC 3、EtAMA 1进行抗原表位的预测,截选抗原表位集中的基因片段；以本实验室柔嫩艾美耳球虫分离株SD-01株孢子化卵囊cDNA为模板扩增这些片段,分段克隆获得串联多表位融合基因,其大小为939 bp,然后定向克隆到真核表达载体pCTCON 2,构建获得pCT-EtC2A1C3质粒。将该串联表达质粒转染到酵母细胞EBY 100中进行诱导表达。分别用三种蛋白的单因子血清,通过Western-Blot和间接免疫荧光鉴定串联蛋白表达情况。(结果)结果显示,经Western-Blot检测,可见大小约为33 KDa的阳性反应条带；间接免疫荧光可以检测到特异性绿色荧光,表明成功构建了表达质粒pCT-EtC2A1C3,并能在酵母细胞EBY 100中表达。
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