【摘 要】
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目的:制备载反义寡核苷酸的阳离子脂质体并考察其细胞的抑制情况及体外转染效率. 方法:以磷脂-十八胺-胆固醇为类脂成分,薄膜超声-吸附-冷冻干燥法制备稳定的载反义寡核
【机 构】
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郑州大学药学院,河南 郑州 450001
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目的:制备载反义寡核苷酸的阳离子脂质体并考察其细胞的抑制情况及体外转染效率.
方法:以磷脂-十八胺-胆固醇为类脂成分,薄膜超声-吸附-冷冻干燥法制备稳定的载反义寡核苷酸阳离子脂质体.激光粒度仪测定冷冻干燥前后脂质体zeta电位及粒径,透射电镜观察其形态,葡聚糖凝胶柱分离未包封的反义寡梭苷酸,紫外法测定冻干前后的载药率.MTT法检测反义寡核苷酸对卵巢癌细胞WCF-7的抑制.荧光显微镜测定不同时间细胞摄取荧光标记m的情况.
结果:海藻糖与甘露醇及甘氨酸为较好的冻干保护剂,制得的阳离子脂质体前体带正电荷,规则球形,大小较均匀,海藻糖作保护剂复溶前后平均粒径为200nm和320nm左右,zeta电位值在+32mv左右,脂质体的载药率复溶后为83.21％.脂质体介导的5-FITC荧光标记的asODN在卵巢癌MCF细胞中的平均转染率2h、4h、8h分别为18％、26％、38％,并且细胞生长明显被抑制.与对照组比较,具有显著性差异(p＜0.05).
结论:海藻糖作为冻干保护剂,薄膜超声-吸附-冷冻干燥法可成功制备反义寡核苷酸阳离子脂质体,稳定性大大改善.该脂质体介导的端粒酶asODN能够有效抑制卵巢癌WCF-7细胞生长,体外转染效率较高.
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