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目的:放射治疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一.端粒稳态是影响放射敏感性的重要因素.TPP1是端粒结合蛋白复合体(Sheherin)的重要成员,对端粒稳态维持起到重要作用.我们前期研究发现TPP1在放射抗拒细胞系中表达升高,但是TPP1对肿瘤细胞放射敏感性的确切影响和机制尚不明确.本实验主要研究TPP1对人结直肠癌细胞HCT116放射敏感性的影响,并初步探讨其作用机制.方法:采用克隆形成实验检测细胞放射敏感性;Southern blot方法检测细胞端粒长度.Western blotting检测TPP1在五株结直肠癌细胞中的表达;采用HCT116细胞分别构建TPP1干扰和过表达的稳定转染细胞株;采用流式细胞仪法检测照射前后细胞凋亡的变化;CCK-8法检测TPP1对肿瘤细胞生长的影响;应用细胞免疫荧光检测照射后端粒损伤灶点(TIF,telomere dysfunction induced foci)形成.结果:TPP1蛋白表达水平与结直肠肿瘤细胞放射敏感性相关,即放射抗拒株中高表达,敏感株中低表达.成功构建了干扰和过表达TPP1的细胞株及各自相应空白对照,Western blotting验证转染效果.克隆形成实验表明,抑制TPP1表达显著增加了HCT116细胞的放射敏感性.CCK-8结果显示干扰TPP1显著降低了HCT116细胞生长.TPP1沉默促进HCT116细胞凋亡并显著增加了其放射诱导凋亡率.端粒损伤标志TIF (TRF2-γ-H2AX)的检测结果显示:HCT116/shTPP1细胞株端粒损伤灶点显著增加;2GyX射线照射后181h,HCT116/shNC组细胞DNA损伤(包括端粒部位损伤)已完成修复,而干扰组细胞(HCT116/shTPPl)直到照射后24h才完成DNA损伤修复,即干扰TPP1抑制了放射后DNA损伤修复进程.于此相反,过表达TPP1降低了放射诱导凋亡,促进了放射后DNA损伤修复,降低了HCT116细胞放射敏感性.结论:TPP1蛋白高表达与结直肠癌细胞放射抗拒相关.干扰TPP1可以通过诱导端粒损伤、促进辐射诱导凋亡和抑制DNA损伤修复等途径促进放射增敏.因此,TPP1和肿瘤细胞放射敏感性密切相关,可能是结直肠癌细胞放射增敏的潜在靶标.