【摘 要】
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目的 抗人IL 1RAP(IL-1 receptor accessory protein)单克隆抗体(McAb)可变区基因克隆及嵌合抗原受体(CARs)重组质粒构建.方法 采用RACE、重叠延伸PCR技术,从3H6E10、10D
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目的 抗人IL 1RAP(IL-1 receptor accessory protein)单克隆抗体(McAb)可变区基因克隆及嵌合抗原受体(CARs)重组质粒构建.方法 采用RACE、重叠延伸PCR技术,从3H6E10、10D8A7杂交瘤细胞总RNA中克隆扩增IL 1RAP McAb的重链可变区(VH)和轻链可变区(V]L)段DNA,并连接成IL1RAP特异性单链抗体可变区基因片段(scFv).将hCD8 α跨膜段、hCD137胞内段、hTCRζ链、hCD8 α引导肽(Signal peptide)、scFv-anti-IL1 RAP连入载体LV-Lac,并与辅助载体pMD2.G、psPAX2共同转染293FT细胞,包装获得病毒颗粒.结果 获得两种抗人IL1RAP McAb的VH及VL基因,3H6E10 VH和VL基因全长402bp和393bp,可分别编码134、131个氨基酸；10D8A7 VH和VL基因全长423bp和381bp,可分别编码141、127个氨基酸.构建重组表达载体LV-3H6E10 scFv-ICD、LV10D8A7 scFv-ICD (ICD： CD8α跨膜段-CD137胞内段-TCRζ链)后,经测序证实目的片段大小正确.
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