【摘 要】
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本研究以25株疫霉、4株腐霉、38株Diaporthe spp.等38种,66个菌株为材料,通过对供试菌株及相关菌株的ITS区及EF-1a基因进行序列分析及比对,并对引物、探针的2级结构等影响多
【机 构】
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中国农业大学; 深圳出入境检验检疫局; 深圳市检验检疫科学研究院;
【基金项目】
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国家质量监督检验检疫总局科技项目“进口大豆重要有害生物分子快速检测及大豆疫病菌活性检测方法”(No.2005IK057)
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本研究以25株疫霉、4株腐霉、38株Diaporthe spp.等38种,66个菌株为材料,通过对供试菌株及相关菌株的ITS区及EF-1a基因进行序列分析及比对,并对引物、探针的2级结构等影响多重反应因素进行综合考虑,设计出针对大豆疫病菌、大豆北方茎溃疡病菌、大豆南方茎溃疡病菌及大豆拟茎点种子腐烂病菌的4对特异性引物及探针,通过对引物、探针浓度、反应条件等因素的优化、测试,多重实时荧光PCR特异性测试,结果表明本实验所设计的4对引物探针具有极好的特异性,建立了4重实时荧光PCR检测方法。对以上4种菌的基因组DNA进行等比例混合后,获得每种菌DNA浓度从10 ng/μL至10 fg/μL(10倍梯度稀释)的6个稀释梯度,进行多重灵敏度测试,灵敏度均达到100fg/μL。
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