PTN在人脐血间充质干细胞向多巴胺能神经元分化过程中的作用及机制研究

来源 :中国医师协会第7届全国检验与临床学术会议暨国际检验与临床高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:baoma123ertswe_ss
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  目的 利用人羊膜上皮细胞条件培养液(ACM)及人重组多效生长因子(rPTN)诱导人脐血间充质干细胞(CB-MSCs)向多巴胺能(DA)能神经元样细胞分化并探讨其诱导分化的可能机制.方法 原代培养人羊膜上皮细胞(AEC)并通过收集和过滤的方法制备ACM,密度梯度离心和贴壁筛选法纯化CB-MSCs,分别加入ACM(ACM组)和rPTN(rPTN组)作为两诱导组,以单纯传代培养的CB-MSCs作为对照组(CON组),培养48h后用免疫细胞化学、RT-PCR及Western blot检测DA能神经元标志物TH、DAT及神经元标志物NSE表达情况,进而判断CB-MSCs诱导分化的程度;免疫细胞化学、RT-PCR及ELISA检测AEC表达PTN情况,免疫细胞化学及RT-PCR检测CB-MSCs在诱导前后表达PTN受体SDC3及ALK情况;结果 AEC表达PTNmRNA,羊膜上皮细胞及羊膜组织免疫细胞化学染色可见PTN阳性细胞,ELISA检测ACM中PTN含量,四份不同人源ACM中PTN含量分别为299.18±8.12, 289.03±7.68, 300.05±8.37, 294.26±10.03;随诱导时间延长,CB-MSCs形态发生变化,同对照组相比,两诱导组TH、DAT、NSE的表达明显增加,rPTN组增加的程度不及ACM组;CB-MSCs能够表达PTN受体SDC3及ALK,诱导后,同对照组相比,SDC3的表达明显增强,rPTN诱导组增强程度不及ACM诱导组,ALK在诱导前后变化不大.
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